尝试方案：微流控夹杂体例制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒

  1. 配制复方脂质-乙醇溶液：

  2. 配制柠檬酸缓冲液

  3. 计较RNA浓度，配制 mRNA-柠檬酸缓冲液：

  4. 微流控夹杂（智能LNP合成仪S1的操作申明）：

  5. 粒径和PDI的检测

  6. 产品的处置和保留

  尝试方案：利用Qubit测定LNP包封率和操纵率

  尝试方案：利用酶标仪测定LNP包封率

  尝试方案：mRNA-LNP转染293T细胞

  参照 Moderna、BioNtech 和 Alnylam 的新冠疫苗配方，以sM102、ALC-0315、MC3为首要阳离子脂质制备包载 mRNA 的脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles, LNPs)。

  ALC-0315、 MC3、和 sM102 是三种可用在人体的脂质。在酸性前提下，质子化构成阳离子脂质，可以或许经由过程静电感化和带负电的 mRNA 连系。脂质与溶有mRNA的水性溶液夹杂后析出，自组装构成载有 mRNA 的脂质纳米颗粒。本尝试中采取微流控夹杂法，让脂质溶液与mRNA溶液在微夹杂器中充实、敏捷、高度可反复地构成粒径均一可控的LNP。在制备进程中，脂质消融在乙醇，核酸消融在酸性缓冲液中，故制备获得的LNP初产品含有高浓度乙醇。是以后续还需要透析或超滤去除残存的乙醇并将溶液系统置换至中性缓冲液中，以备后续生物学尝试和持久保留。

  装备：FluidicLab 智能LNP合成仪（型号：LNP-S1江南体育）(微流控LNP合成)

  微夹杂芯片：FluidicLab LNP-B1

  尝试步调：

  1. 配制复方脂质-乙醇溶液

  2. 配制柠檬酸缓冲液

  3. 计较RNA浓度，配制 mRNA-柠檬酸缓冲液

  4. 微流控夹杂（智能LNP合成仪S1的操作申明）

  5. 粒径和PDI的检测（杰出的LNP合成成果如图）

  6. 产品的处置和保留

  6.1．透析

  6.2．超滤

  尝试步调具体内容较长，可阅读器搜刮FluidicLab前去官网查看完全尝试方案。

  附件：

  尝试前提：仪器：Fluidiclab-S1 ；芯片：Fluidiclab-B1

  MC3配方：12 mM浓度；流速比（脂相：水相）= 1 : 3；前废液 0.2 mL； LNP空包无mRNA；

  合成初始——初产品经柠檬酸缓冲液稀释5倍后检测；

  超滤利用Millipore 15mL/30 kd 超滤离心管(外径50mL尺寸)[UFC903096]。

  透析利用Thermo Scientific™ Slide-A-Lyzer 透析盒 (20K MWCO)[66003]。

  超滤后浓缩则利用[66003]透析盒后再利用[UFC903096]进行浓缩。

  尝试步调参照第一节：《尝试方案：微流控夹杂体例制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒（mRNA-LNP的制备）》。

  FluidicLab 供给LNP的DLS检测，包封检测，细胞转染等方案，接待咨询。